Иммунофлуоресцентный набор для определения специфичных IgG IgA и IgM антител к Chlamydia psittaci в сыворотке человека

SeroFIA Chlamydia psitacci, IgG/ A/ M, 105 (иммунофлуоресцентный метод)

Хламидия, грамотрицательная внутриклеточная бактерия, состоит из четырех видов: C. trachomatis, C. pneumoniae (TWAR), C. psittaci, C. pecorum. С. trachomatis подразделяется на 15 серотипов, в различной степени обладающих схожими иммуногенными эпитопами. С. trachomatis - наиболее частая причина заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП) и ассоциируется с негонококковыми уретритами и эпидимитами у мужчин, цервикитами, уретритами и пельвиоперитонитом у женщин, синдромом Рейтера у людей с HLA-B27 типом и неонатальными коньюктивитами и пневмонией у новорожденных. С. pneumoniae является распространенной причиной пневмоний у людей. С. pneumoniae вызывает до 10% случаев приобретенной пневмонии. С. pneumoniae ассоциируется с острыми респираторными заболеваниями, пневмонией, астмой, бронхитом, фарингитом, ocтpым лeгoчным cиндpoмом при cepпoвиднoклeтoчнoй aнeмии, атеросклеротическими повреждениями коронарных артерий и синдромом Гийена-Барре. С. psittaci является патогеном для многих видов, от моллюсков и птиц до млекопитающих и является причиной тяжелый пневмоний. Для диагностики хламидийных инфекций используются серологические методы. Серологические методы позволяют проводить неинвазивную идентификацию как периферических, так и хронических хламидийных инфекций, при которых прямые методы недостаточно эффективны. Более того, присутствие определенных типов антител может также свидетельствовать об определенном этапе заболевания. Первичная хламидийная инфекция характеризуется преобладанием IgM в период 2-4 недели и задержкой иммунного ответа IgG и IgA от 6 до 8 недель. После острой инфекции С. pneumoniae IgM антитела обычно исчезают в течение 2-6 месяцев, титр IgG антител растет и затем обычно медленно понижается; в то время как IgA антитела имеют тенденцию к быстрому исчезновению. Вторичные хламидийные инфекции характеризуются отсутствием иммунного ответа IgM и быстрым ответом IgG и IgA. Показано, что IgA антитела являются надежным иммунологическим маркером первичной, хронической инфекции или ее реактивации. Эти антитела обычно быстро возвращаются к базовому уровню после лечения и эрадикации хламидийной инфекции. Персистенция повышенных титров IgA рассматривается как признак хронической инфекции. В изучении, проведенном с группой взрослых пациентов с респираторными инфекциями, было показано, что при не выполнении определения IgA антител у больных была пропущена одна пятая всех случаев С. pneumoniae. IgG антитела персистируют долго и снижаются очень медленно. Следовательно, присутствие IgG антител свидетельствует о хламидийной инфекции на неопределенном этапе. Однако, четырехкратный рост IgG или высокие уровни IgG антител могут быть признаком протекающей хронической или системной инфекции. Набор SeroFIA C.psittaci основан на макро-ИФ методе, с использованием в качестве антигена выделенные элементарные тельца C.psittaci (SZ-1).

Принцип метода

• Выделенные элементарные тельца (Ebs) C.psittaci зафиксированы в лунках SeroFIA слайдов.

•Разведенные образцы сывороток пациентов инкубируют 30 минут при 37ºC в каждом ряду с соответствующими антигенами.

•Несвязавшиеся компоненты сывороток удаляются при промывке.

•Конъюгат флуоресцеина с антителами к человеческим IgG, IgA или IgM вносят в лунки и инкубируют 30 минут при 37ºC.

•Несвязавшийся конъюгат удаляется при промывке. Слайды высушивают и покрывают, по 3 капли заключающей среды.

•Готовые слайды оценивают с помощью флуоресцентного микроскопа. Положительная реакция проявляется в виде яркой яблочно - зеленой флуоресценции Ebs на темном фоне.

•Качественное определение выполняется в одном разведении сывороток. Для полуколичественного определения выполняется титрование до конечной точки.